U8国际集团科技有限公司-精准营养与水肥一体化解决方案提供商

　　简介：本文介绍了生物有机肥肥料的国家标准，以及各个指标的检测方法。具体包括：有效活菌数，有机质，水分，PH，粪类大肠菌群数，蛔虫卵死亡率，N，P5O2，K2O,重金属等指标的测定方法和流程。可供同行人士参考，可大大缩减您查阅资料的时间，本文采用word文字编辑，下载后可以直接复制粘贴。

　　称取固体样品10g，加入带玻璃珠的100ml的无菌水中，静置20分钟，在旋转式摇床上200r/min充分震荡30分钟，即成母液菌悬液。

　　用5ml无菌转液管分别吸取5ml上述母液菌悬液加入45ml无菌水中，按1比10进行系列稀释，分别得到10-1,10-2,10-3、、、稀释倍数的菌悬液。

　　每个样品取3个连续适宜稀释度，用0.5ml无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂布于琼脂表面。

　　根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应该重做。

　　以出现20-30个菌落数的稀释度的平板为计数标准，（丝状线个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其有效菌平均菌落数在20-300个之间时，则以该菌落数计算。若有两个稀释度，其有效菌落数在20-300个之间时，应该两者菌落总数之比值决定，若其比值小于等于2应该计算两者的平均数；若大于2，则以稀释度小的菌落数平均数计算。有效活菌数按下列公式计算，同事计算杂菌数。

　　用定量的重铬酸钾-硫酸溶液，在加热条件下，使有机肥料中的有机碳氧化，多余的重铬酸钾用硫酸亚铁标准溶液滴定，同时以二氧化硅为添加物作空白试验。根据氧化前后氧化剂好量，计算有机碳含量，乘以系数1.724，为有机质含量。

　　重铬酸钾标准溶液0.1mol/L：称取经过130摄氏度烘3-4小时的重铬酸钾4.9031g，先用少量水溶解，然后转移入1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。

　　重铬酸钾溶液0.8mol/L：称取重铬酸钾39.23g，先用少量水溶解，然后转入1L的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。

　　硫酸亚铁0.2mol/L：称取七水硫酸亚铁55.6g，溶于900ml水中，加硫酸20ml溶解，稀释定容农业数字化至1L，摇匀备用，此溶液的准确浓度以0.1mol/L重铬酸钾标准液标定，现用现标定。

　　0.2mol/L的硫酸亚铁标准溶液的标定：吸取重铬酸钾标准溶液20ml，加入150ml三角瓶中，加硫酸3-5ml和2-3滴邻啡啰啉指示剂，用硫酸亚铁标准液滴定，根据硫酸亚铁标准液滴定时的消耗量按下式计算其准确浓度。

　　邻啡啰啉指示剂：称取硫酸亚铁（分析纯）0.695g和邻啡啰啉1.485g溶液100ml水中，摇匀备用，指示剂易变质，应该密闭保存于棕色瓶中。

　　称取试样0.2-0.5g，置于500ml的试剂瓶中，准确加入0.8mol/L重铬酸钾溶液50ml，再加入50ml浓硫酸，加一弯颈小漏斗，置于沸水中，待水浴沸腾后保持三十分钟。取出冷却至室温，用水冲洗小漏斗，洗液承接于三角瓶中。取下三角瓶，将反应物无损转入250ml容量瓶中，冷却至室温，定容，吸取50ml溶液于250ml三角瓶内，加水至约100ml，加2-3滴邻啡啰啉指示剂，用02.mol/l硫酸亚铁标准溶液滴定近终点时，溶液由绿色变成暗绿色，再逐滴加入硫酸亚铁标准溶液直至生成砖红色为止。同时称取02.g二氧化硅代替试样，按照相同分析步骤，使用同样的试剂，进行空白试验。

　　如果滴定试样所用硫酸亚铁标准溶液用量不到空白试样所用硫酸亚铁标准液用量的三分之一时，则应减少称取量，重新测定。

　　将空铝合置于干燥箱中105摄氏度烘干0.5小时，冷却后称量记录空铝合的质量，然后称取2份平行样品，每份20g，分别加入铝合中并记录质量，将装好样品的铝合置于干燥箱中105摄氏度下烘干4-6小时，取出置于干燥器中冷去20min，后进行称量，水分含量按照下式计算，结果为两次测量的平均值。

　　测定步骤：称取样品15g，放入50ml的烧杯中，按1:2的比例将无离子水加到烧杯中，搅拌均匀。然后静置30min，测样品悬液的PH，仪器读数稳定后记录。

　　在无菌操作下称取样品10g或吸取样品10ml，加入到带玻璃珠的90ml无菌水中，置于摇床上200r/min充分震荡30min，即成10-1稀释液。

　　选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液1ml加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置44.5摄氏度恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24小时。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产气不产酸，则为粪大肠菌群阴性，如果有产酸产气或只有产酸的发酵管，则按分离培养步骤进行。

　　从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线）中分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色，染色反应阳性为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽孢杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5摄氏度条件下培养24小时。观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性。

　　证实试验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克肥料样品中的粪大肠菌群数。

　　将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。

　　称取5.0～10.0 g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50 mL离心管中，注入NaOH溶液25～30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以200～300 r/ min频率振荡10～15 min。振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15～30 min 后，振荡10～15 min。

　　从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min后，弃去上清液。然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。

　　往离心管中加入少量饱和 NaNO3 溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和 NaNO3 溶液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，用饱和 NaNO3 溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min。

　　用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3 溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作３～４次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。

　　将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。

　　抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。当观察有蛔虫卵时，将含有蛔虫卵的滤膜进行培养。

　　在培养皿的底部平铺一层厚约1 cm 的脱脂棉，脱脂棉上铺一张直径与培养皿相适的普通滤纸。为防止霉菌和原生动物的繁殖，可加入甲醛溶液或甲醛生理盐水，以浸透滤纸和脱脂棉为宜。

　　将含蛔虫卵的滤膜平铺在滤纸上，培养皿加盖后置于恒温培养箱中，在28 ℃～30 ℃ 条件下培养，培养过程中经常滴加蒸馏水或甲醛溶液，使滤膜保持潮湿状态。

　　培养10～15 d ，自培养皿中取出滤膜置于载玻片上，滴加甘油溶液，使其透明后，在低倍镜下查找蛔虫卵，然后在高倍镜下根据形态，鉴定卵的死活，并加以计数。镜检时若感觉视野的亮度和膜的透明度不够，可在载玻片上滴一滴蒸馏水，用盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣，与水混合均匀，盖上盖玻片进行镜检。

　　有机肥中的有机氮经过硫酸-过氧化氢消煮，转化为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸溶液吸收，以标准酸溶液滴定，计算样品中总氮含量。

　　定氮混合指示剂（0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶液100ml的95%的乙醇中），

　　硼酸-指示剂混合液：每升2%硼酸溶液加入20ml定氮混合指示剂，并用稀碱或稀酸调至红紫色（PH约4.5）。此溶液放置时间不宜过长，如在使用过程中PH有变化，需随时用稀碱或稀酸调节。

　　称取过筛的风干试样0.5-1g，置于凯氏烧瓶底部，用少量水冲洗沾附农业数字化在瓶壁上的试样，加5ml硫酸和1.5ml过氧化氢，小心摇匀，瓶口放一弯劲小漏斗，放置过夜。在可调电炉上缓慢升温至硫酸冒烟，取下，稍冷加15滴过氧化氢，轻轻摇动凯斯烧瓶继续加热10min，除尽剩余的过氧化氢。取下稍冷，小心加水至20-30ml，加热至沸。取下冷却，用少量水冲洗弯劲小漏斗，洗液收入原凯斯烧瓶中。将消煮液移入100ml容量瓶中，加水定容，静置澄清或用无磷滤纸干过滤到具塞三角瓶中，备用。

　　吸取消煮清液50ml于蒸馏瓶内，加入200ml水。于250ml三角瓶加入10ml硼酸-指示剂混合液承接于冷凝管下端，管口插入硼酸液面中。由筒型漏斗像蒸馏瓶内缓慢加入15ml氢氧化钠溶液，关好活塞。加热蒸馏，待蒸馏出体积约100ml，即可停止蒸馏。

　　用硫酸标准溶液或盐酸标准溶液滴定溜出液，由蓝色刚变至紫红色为终点，记录消耗酸标准溶液的体积。空白测定所消耗标准液的体积不得超过01.ml，否则应重新测定。

　　有机肥试样采用硫酸和过氧化氢消煮，在一定酸度下，待测液中的硫酸根离子与偏钒酸和钼酸反应生成黄色三元杂多酸。在一定浓度范围内，黄色溶液的吸光度与磷含量成正比例关系，用分光光度法测定磷含量。

　　钒钼酸铵试剂：A液（称取25g钼酸铵溶液400ml水中）；B液（称取1.25g偏钒酸铵溶液300ml沸水中，冷却后加250ml硝酸），冷却。在搅拌下将A液缓慢注入B液中，用水稀释至1L混匀，储于棕色瓶中。

　　吸取5ml-10ml试样溶液，于50ml容量瓶中，加水至30ml左右，与标准溶液系列同条件显色，比色，读取吸光度。

　　吸取磷标准溶液0,1,2.5,5,7.5,10,15ml，分别置于七个50ml容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，加水至30ml左右，加2滴2,4-二硝基酚指示剂溶液和硫酸溶液调节溶液刚呈微黄色，加10ml钒钼酸铵试剂，摇匀，用水定容。此溶液为1ml含磷0,1,2.5,5，7.5,10,15ug的标准溶液。在室温下放置20min后，在分光光度计波长440nm用1cm光径比色皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度。根据浓度和吸光度绘制标准曲线或求出直线回归方程。

　　C2——————由标准曲线查得或由回归方程求得显色液磷浓度，单位为微克每毫升；

　　有机肥料试样经过硫酸和过氧化氢消煮，稀释后用火焰光度法测定。在一定浓度范围，溶液中钾浓度与发射强度成正比例关系。

　　钾标准溶液：吸取10ml钾标准储备液于100ml容量瓶汇总，用水定容，此溶液1ml含钾100ug。

　　吸取钾标准溶液0,1,2.5,5,7.5,10ml分别置于6个50ml容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，用水定容，此溶液为1ml含钾0,2,5,10,15,20ug的标准溶液系列。在火焰光度计上，以空白溶液调节仪器零点，以标准溶液系列中最高浓度的标准溶液调节满度至80分处。再依次由低浓度至高浓度测量其他标准溶液，记录仪器示值。根据钾溶液和仪器示值绘制标准曲线ml容量瓶中，用水定容，与标准溶液系列同条件在火焰光度计上测定，记录仪器示值。每测定5个样品后需用钾标准溶液校正仪器。

　　称取试样5-8g，置于400ml高型烧杯中，加入30ml盐酸和10ml硝酸，盖上表面皿在电热板上徐徐加热，等激烈反应结束后，稍微移开表面皿继续加热，使酸全部蒸发至近干涸，以赶尽硝酸。冷却后加入50ml盐酸溶液，加热溶解，冷却至室温后转移到250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，干过滤，弃去最初几毫升滤液，待用。

　　在酸介质中，五价砷通过碘化银、氯化汞及初生态氢还原为砷化氢，用二乙基二硫代氨基甲酸银的吡啶溶液吸收，生成红色可溶性胶态银，在波长540nm处测定其吸光度，吸光度的大小与砷含量成正比。

　　氯化亚锡-盐酸溶液：溶解40g氯化亚银在25ml水和75ml盐酸的混合液中；

　　乙酸铅棉花：溶解50g乙酸铅于250ml水中，用此溶液将脱脂棉浸透，取出挤干以除去多余溶液，储存在密闭容器中。

　　测定砷的所有玻璃容器，必须用浓硫酸-重铬酸钾洗液洗涤，再以水清洗干净，干燥备用；

　　于各雏形瓶中加10ml盐酸和一定量水，必须使体积约为40ml，此时溶液酸度为c（HCl）=3mol/L。然后加入2ml碘化钾溶液和2ml氯化亚锡溶液，混匀，放置15min。

　　置少量乙酸铅棉花于玻璃管内以吸收硫化氢、二氧化硫等。吸取5ml二乙基二硫代氨基甲酸银吡啶溶液置于10ml量筒中，按图1链接仪器，磨口玻璃吻合处在反应过程中应保持密封。

　　称量5g锌粒加入雏形瓶中，迅速链接好仪器，使反应进行约45min，移去量筒，充分摇匀溶液所生成的紫红色胶态银。用1cm吸收池，在波长540nm处，以砷含量为0的标准溶液为参比溶液，调节分光光度计吸光度为零后，测定各标准溶液的吸光度。

　　以标准溶液的砷含量（ug）为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。

　　测定：吸取一定量的试液于100ml雏形瓶中，加10ml盐酸；补充水使其体积约为40ml，加入1g抗坏血酸。后面按工作曲线步骤中相关步骤操作，即从“然后加入2ml碘化钾溶液和2ml氯化锡溶液，、、、、、、”开始，直至“、、、、、测定溶液的吸光度”为止完成测定。